尊龙凯时推出了一种前沿技术——CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation),它为研究DNA-蛋白相互作用提供了新的视角,尤其是在转录因子和组蛋白修饰的全基因组结合位点的探索中。CUT&Tag的基本原理是通过抗体识别特定的目标蛋白或染色质修饰,然后利用蛋白酶Tn5转座酶实现高效的DNA片段化和文库构建。该技术由Stephen Henikoff团队于2019年开发,作为ChIP-Seq(免疫共沉淀测序)的改良替代方法。由于其高灵敏度、低背景噪声和较低的细胞需求量,CUT&Tag逐渐成为揭示基因调控机制和解析染色质状态的重要工具,广泛应用于表观遗传学研究、转录因子结合位点分析、疾病机制解析、药物筛选以及单细胞水平的基因调控研究等多个领域。
依托于先进的Protein A/G-Tn5融合蛋白体系和高通量测序平台,尊龙凯时生物科技提供专业的CUT&Tag技术服务,涵盖样本制备、文库构建、高通量测序和生物信息学分析的全流程。我们的技术团队具备丰富的表观基因组学经验,能够高效准确地解析蛋白质与DNA的相互作用,助力科研人员深入揭示基因调控的深层机制。
组蛋白通过形成核小体来压实和保护DNA,其修饰(如乙酰化、甲基化)与DNA甲基化共同调控基因表达。这些修饰的状态和动态变化对于维持细胞功能至关重要,也与多种疾病的发展密切相关。因此,理解组蛋白与DNA之间复杂而精确的相互作用,对于揭示正常细胞过程和疾病状态,尤其是癌症,具有重要的科学和临床意义。此外,蛋白质-DNA相互作用是基因转录调控的核心,是启动基因转录的基础。
为了解这些复杂的相互作用机制,科学家们开发了多种技术,包括凝胶阻滞、DNase I足迹实验、甲基化干扰、ChIP-Seq及CUT&Tag等。其中,CUT&Tag技术正在迅速成为研究蛋白质-DNA相互作用和染色质状态的前沿技术。
ChIP-Seq(染色质免疫共沉淀)是一种通过特异性地富集蛋白质结合的DNA片段来进行结合位点分析的方法。然而,ChIP-Seq在细胞起始量要求、假阴性/假阳性率、实验条件的选择、抗体依赖性、重复性以及信噪比等方面存在缺陷。相比之下,CUT&Tag通过Protein A/G-Tn5融合蛋白直接结合目标蛋白,省去了传统方法中的交联步骤,大幅降低了背景噪声,并实现高分辨率的结合位点检测。
CUT&Tag的关键步骤包括使用ConA磁珠结合细胞膜上的糖蛋白,提取细胞核,同时通过洋地黄皂苷透化细胞膜。接着,添加特异性一抗孵育并洗涤去除非特异性结合,再加入二抗确保抗体复合物准确绑定靶标区域。然后,Protein A/G-Tn5融合蛋白结合抗体复合物,Tn5转座酶被精准定位到目标DNA区域,通过加入含有镁离子的反应液激活Tn5酶,完成DNA片段化和文库构建,最终通过高通量测序获得数据。
如在癌症研究领域中,CUT&Tag被用来揭示H3K18la在胰腺导管腺癌(PDAC)发病机制中的作用,重点研究了组蛋白乳酸化与PDAC患者预后的相关性。这一研究为理解PDAC的生长和转移机制提供了重要线索,同时也为新治疗靶点的发现和预后生物标志物的搜寻奠定了基础。
通过这些研究,CUT&Tag正迅速推动表观遗传学研究的发展,尊龙凯时为您提供专业的CUT&Tag技术一站式服务,帮助您深入解析染色质状态,揭示基因调控的奥秘,为疾病机制研究和药物开发提供强有力的支持。我们的服务涵盖从样本准备、抗体优化到高通量测序及数据分析的全流程支持,确保向您提供高质量的染色质修饰与转录因子结合位点分析数据。选择尊龙凯时,让您的研究更上一层楼!