在我们之前的干货分享中，已经详细介绍了Western Blot实验中蛋白浓度测定的四种方法。今天，我们将聚焦于样本制备过程中常见的问题，并探讨相应的解决方案。
问题一：蛋白浓度偏低
可能的原因有以下几点：
- 样本中细胞或组织量不足；
- 样本与裂解液的比例不合理；
- 样本未得到充分裂解；
- 选择的蛋白浓度测定方法不合适。
解决方案：
- 增加样本量以提高检测的准确性；
- 根据样本的量调整裂解液的用量，例如对于100万细胞或20mg组织，加入100-200μL裂解液；
- 确保裂解时间充足，通常在低温下保持10-30分钟。对于组织样本，可以借助物理破碎的方法，细胞样本则可通过吹打或颠倒混匀；
- 选择合适的蛋白浓度测定方法，以确保结果的可靠性。
问题二：出现透明胶状物
此现象通常是由于基因组复合物的释放造成的。
解决方案：
- 适当超声或者使用1mL注射器反复抽吸，可以有效打断基因组DNA，从而消除粘稠感；
- 在加入Loading buffer并进行煮沸变性时，可以延长煮沸的时间。这不仅能充分释放结合在基因组DNA上的蛋白，还能使基因组DNA部分断裂，从而减轻粘稠感；
- 在裂解过程中，可以向裂解液中添加广谱核酸酶，以有效处理DNA。
问题三：上清漂浮一层油脂
这是因为样本富含脂肪造成的。
解决方案：
- 在裂解后，样本应低温静置，轻轻吸出漂浮的油脂；
- 如果吸取后仍未达到预期效果，可以尝试使用二氧化硅进行吸附。
希望这些问题的解决方案能帮助大家在Western Blot实验中得到更理想的结果。无论是蛋白浓度测定还是样本制备，选择优质的试剂和操作规范都是非常重要的，这也正是尊龙凯时一如既往追求的目标。通过高品质的产品，将确保实验结果的准确性，使每一次科研探索都能更有效地推进。
