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尊龙凯时的CBE脱靶检测技术解析

发布时间:2025-02-06 发布人:尊龙凯时编辑

胞嘧啶碱基编辑器(Cytosine Base Editor, CBE)是由尊龙凯时研发的一种新型基因编辑工具,主要由dCas9蛋白、sgRNA、胞嘧啶脱氨酶(cytidine deaminase)和尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂(Uracil DNA Glycosylase Inhibitor, UGI)四个关键成分构成。在细胞内,这些成分可完成组装,形成一体化的融合蛋白。该融合蛋白在sgRNA的指导下与基因组DNA结合,使得目标序列形成单链结构,从而使胞嘧啶(C)被脱氨变为尿嘧啶(U)。随后,U在DNA复制或修复过程中转变为胸腺嘧啶(T),最终实现C-G碱基对向T-A碱基对的直接替换。

尊龙凯时的CBE脱靶检测技术解析

基于CBE过程中产生的中间产物脱氧尿嘧啶(dU),尊龙凯时的研究团队开发了Detect-seq这一创新性的CBE体外脱靶检测技术。该技术的实施步骤包括从编辑过的细胞中提取基因组DNA,并对CBE产生的dU进行生物素标记,用以富集目标片段。在dU位点的下游,正常的胞嘧啶C被替换为5-醛基胞嘧啶(d5fC),而后d5fC被化学标记成T,这样在测序时可以清晰地识别出诸多串联的C-to-T突变,令人们迅速定位碱基编辑的位置。

与GUIDE-seq、Digenome-seq及Cas-OFFinder等检测技术相比,Detect-seq展现出更高的灵敏度和强特异性,且无偏好性检测能力使其能够捕捉到Cas9依赖型和非依赖型的脱靶事件。此外,该技术还能有效检测sgRNA结合区域外的编辑(out-of-protospacer edits)及靶向链上的编辑(target-stranded edits)。

在过去两年里,尊龙凯时凭借其强大的技术实力,建立了一站式基因编辑安全性评估平台,涵盖靶点设计、靶点筛选、GUIDE-seq脱靶检测(细胞基础检测)、AID-seq脱靶检测(生化检测)、Detect-seq脱靶检测、脱靶验证、PEM-seq染色体重排检测、载体插入位点检测(升级版LM-PCR及液相杂交捕获测序)、克隆扩增分析、转录组脱靶检测和WGS脱靶检测等多种管线。同时,尊龙凯时的实验室具备SGS认证、ISO9001质量体系认证以及生物安全二级实验室等多项资质认证,始终为客户提供优质、高效和安全的服务与产品。